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实验步骤:
1.用 2 mL D-PBSA液洗涤细胞。
2.用 1 mL 固定液于室温下固定细胞 5 min。
3.用 2 mL D-PBSA洗涤细胞 2次。
4.将1mL 底物/染色液加入到每个培养子内 ,37℃孵音2h.
5.用 2 mL D-PBSA液冲洗每孔细胞,在倒置显微镜下观察细胞,计数蓝染( β-gal 阳性)细胞。
6.培养板的储存。在每孔加 1 mL 含 10%甲醛的缓冲盐溶液,室温下固定 10 min,然后用缓冲盐溶液洗涤细胞,4℃ 储存缓冲盐溶液。
衰老细胞:胞质呈蓝绿色 / 深蓝色
正常细胞:基本不着色
细胞爬片
组织冰冻切片(少数情况)
PBS 洗涤
固定液固定 10–15 min
PBS 洗净
加入染色工作液(含 X-Gal)
37℃ 恒温孵育过夜(12–16 h)
PBS 洗涤,显微镜观察拍照
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