碱性磷酸酶染色检测技术

简要描述：碱性磷酸酶染色检测技术原理:
在一定条件下，使细胞中的酶作用于酶的底物，使其产物在原地进行捕捉、沉淀转化为有色产物，细胞组织中的碱性磷酸酶在碱性(PH9.0-9.6)环境下使作用液中的底物(a-磷酸萘酚钠)水解，产生出a萘酚，然后再与偶氨盐偶联,生成不溶性的耐晒染料

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实验操作流程:

1、取材、固定、包埋、切片;

2、取已粘好烘干的切片两块，放入二甲苯(一)→二甲苯(二)(各3-4分钟)的染缸中进行脱蜡，再经100%乙醇(一)

→100%<醇(二)→95%乙醇→90%乙醇 →70%醇→30%乙醇→水。每级各一分钟，在移切片时，用镊子夹住切片震荡

并提起，放下反复几次，在移入下一染缸边缘前稍停留，让溶液滴净后，再入下一染缸，以免把上一染缸溶液过多带入下

一染缸，而影响切片质量;

3、将其中一块切片以蜡笔作一标记(用作对照组切片)，放入沸水中煮沸5分钟;

4、将两块切片均放入AKP作用液中孵育30-60分钟，作用液要事先预热到37℃，水浴中进行;

5、取出切片在蒸馏水中洗涤;

6、放入硝.酸.钴溶液2-3分钟;

7、蒸馏水冲洗干净，否则切片易被污染，影响定位;

8、切片浸入硫化铵中2-3分钟;

9、蒸馏水冲洗干净;

10、经各级酒精脱水。即30%乙醇→70%乙醇→90%乙醇→950%乙醇→100%乙醇(二)→100%乙醇(一)，各级一分钟。

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