TUNEL检测技术服务

简要描述：TUNEL技术可对组织或细胞中凋亡小体或单个凋心细胞进行染色，能准确反映细胞凋亡最典型的生物化学和形态特征。凋亡细胞内内源性核酸内切酶被激活而将自身染色体DNA切断成缺口或3-OH末端片段这一特点，利用脱氧核苷酸末端转移酶将标有标记物的脱氧核苷酸转移到3-0H末端，再用免疫组化法或免疫荧光检测凋亡细胞。

更新时间：2026-03-20
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1.用二甲苯浸洗2次，每次5min;

2.用梯度7醇(100.95.90.80、70%)各浸洗1次，每次3min:注:上面两步是针对石蜡切片样木的外理

3.用Proteinase K作液外理组织15 30 min 在21-370(温度、时间、浓度均需摸索)或者加细胞通透液8min

4.PBS漂洗2次;

5.制备TUNEL反应混合液，处理组用50ulTdT+450ul 荧光素标记的dUTP液混匀;而阴性对照组仅加50ul 荧光素标记的dUTP液，阳性对照组先加入100ul DNase 1，反应在15~25℃x10min，后面步骤同处理组。

6.玻片干后，加50uI TUNEL反应混合液(阴性对照组仅加50u荧光素标记的dUTP液)于标本上，加盖玻片或封口膜在暗湿盒中反应37℃x1h。

7.PBS漂洗3次;

8. 可以加1滴PBS在荧光显微镜下计数凋亡细胞(激发光波长为450~500nm，检测波长为515~565nm);

9.玻片干后加50ul converter-POD干标本上，加盖玻片或封口膜在暗湿盒中反应37°cx30min.

10.PBS漂洗3次，

11.在组织处加50~100uIDAB底物，反应15~25℃℃x10min;

12.PBS漂洗3次;

13.拍照后再用苏木素或电其绿复染，几秒后立即用自来水冲洗。梯度洒精脱水，二电苯透明，中性树胶封片。

14.加一滴PBS或甘油在视野下，用光学显微错观察凋广细胞(共计200~500个细胞)并拍照，可结合调广细胞形太特征来综合判断(未染色细胞变小，胞膜完整但出现发泡现象，晚期出现凋亡小体，贴壁细胞出现邹缩、变圆、脱落;而染色细胞呈现染色质浓缩、边缘化，核膜裂解，染色质分割成块状/凋亡小体。

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